时间:2023/11/20来源:本站原创作者:佚名

虹彩病毒是变温脊椎动物的一种重要病原体,被认为是对水产养殖鱼类生产的一个重大威胁。其中,大黄鱼虹彩病毒自年首次被报道以来,由于缺乏合适的细胞培养模型,研究进展缓慢。近日,凌恩生物客户浙江省海洋水产研究所及福建农林大学发表文章“GeneticandPathogenicCharacterizationofaNewIridovirusIsolatedfromCage-CulturedLargeYellowCroaker(Larimichthyscrocea)inChina”,组装获得了大黄鱼(Larimichthyscrocea)中虹彩病毒基因组,并首次对大黄鱼中虹彩病毒的遗传和致病性特征化进行系统研究,扩展了研究人员对虹彩病毒的了解。

发表期刊:Viruses(IF=5.)

发表时间:

样本类型:大黄鱼的鳃、脾脏和肾脏的组织样本

作者单位:浙江省海洋水产研究所福建农林大学

实验方法:电镜观察、病毒基因组测序等

主要结果

1、病原体的鉴定

根据电镜结果,细胞质中有大量的病毒颗粒。病毒颗粒直径为-nm,具有电子致密核心(图1)。qPCR结果表明,6条感染鱼中有3条对大黄鱼虹彩病毒(LYCIV)呈阳性,Ct值分别为28.11、23.76和31.30。其余三个样品的Ct值分别为0、36.76和37.84。

图1脾脏组织细胞中病毒颗粒的电镜图

A,多个病毒在同一个细胞中;B,在放大的图像中可见成熟病毒粒子的外膜和中央电子透光核。

2、病毒基因组测序和系统发育分析

本研究组装得到病毒基因组(NCBI登录号:MW)全长为,bp,GC含量为53.5%(表1)。共鉴定出个ORF在有义(R)和反义(L)DNA链上编码45-个氨基酸的蛋白质。其中43个基因与其他虹彩病毒的基因高度同源,并具有明确的功能(图2)。

表1LYCIV-ZS-全长基因组的核苷酸鉴定

图2LYCIV-ZS-基因组结构

系统发育进化树结果表明,本研究获得的病毒与鲳鲹虹彩病毒系统发育紧密聚集,形成了在亚洲分离的其他海洋鱼类虹彩病毒属中的病毒的亚系(图3),将这种新型病毒命名为大黄鱼虹彩病毒LarimichthyscroceaIridovirusZS-(LYCIV-ZS-)。

图3LYCIV-ZS-和其他代表性虹彩病毒进行系统发育树分析

3、MCP的原核表达和纯化以及特异性抗体的产生

SDS-PAGE和蛋白质印迹(WB)分析结果表明,MCP蛋白分子量约为50kDa。免疫荧光法(IFA)显示pcDNA-3.1-MCP重组质粒转染细胞有特异性荧光,而免疫前血清转染细胞中未检测到信号(图4)。

图4LYCIVMCP蛋白的表达及抗体的制备

4、LYCIV-ZS-在大黄鱼中的致病性

感染LYCIV-ZS-的大黄鱼组显示累积死亡率为52%,主要在注射后4至9天死亡。在模拟感染组中,在注射后9,10和12天死亡(图5A)。通过qPCR对组织样本的分析显示,在感染鱼类的脾脏、肾脏、鳃和头肾中检测到LYCIV,在注射后14天内可持续检测到相当数量的病毒基因组拷贝。

小结

本研究鉴定出一个新的大黄鱼虹彩病毒株,完成了其全基因组测序,并开展了致病性研究,为大黄鱼虹彩病毒防控奠定了理论基础和数据支持。

参考文献:GeneticandPathogenicCharacterizationofaNewIridovirusIsolatedfromCage-CulturedLargeYellowCroaker(Larimichthyscrocea)inChina.

DOI:10./v1408


转载请注明原文网址:http://www.13801256026.com/pgjg/pgjg/6702.html
------分隔线----------------------------